两名第66远征队的宇航员于美当地时间3月14日正在为周二（15日）的太空行走做最后的准备，此前任务经理在周一早些时候做出了最后的决定。NASA TV将于美国东部时间3月14日下午2点直播ISS经理讨论即将进行的太空行走活动的简报。
美国的Quest气闸已被配置为接待NASA飞行工程师Kayla Barron和Raja Chari，当他们在周二上午8:05将美国的宇航服设置为电池电源时，标志着为时六个半小时的太空行走开始。两人将离开Quest号，然后转到Starboard-4桁架结构，并安装改装套件进而为空间站第三次推出太阳能阵列做好准备。NASA TV应用及网站将于周二上午6:30开始直播太空行走。
Barron和Chari于周一开始准备他们的宇航服并在Quest内摆放他们的太空行走工具。之后，他们跟NASA的飞行工程师Tom Marshburn和欧空局的Matthias Maurer一起进行最后的程序审查，另外还将跟地面的专家进行了会谈。Marshburn和Maurer将帮助太空漫步者穿脱他们的防护服并在外部维护工作中监测和指导他们。
NASA飞行工程师Mark Vande Hei则于周一在Kibo实验舱内安装一个小型卫星展开器时开始重点关注另一项即将进行的外部工作。他将部署器放在Kibo的气闸内，它将被日本机械臂抓住、放在外层空间的真空中并指向远离空间站的地方。很快，一组CubeSat将被释放到地球轨道以用于各种教育和科学研究活动。
空间站俄罗斯部分的两名宇航员、指挥官Anton Shkaplerov和飞行工程师Pyotr Dubrov则继续研究可能抵消太空生活影响的反重力服的有效性。这套被称为下体负压服的反重力服有能力将汇集到船员头部的液体引向腿部和脚部并扩大静脉和组织。这可能会防止由太空引起的头部压力和视力问题并缓解人类返回地球时所面临的重力。